GB/T 5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》：新增產氣莢膜梭狀芽孢桿菌的測定方法

2023年3月17日經國家市場監督管理總局（國家標準化管理委員會）批準發布GB/T 5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》系列標準，代替實施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活飲用水標準檢驗方法》。

新標準將于2023年10月1日起正式實施。 GB/T 5750-2023標準歷時5年，經過了3輪意見征求，有280+單位參與研制與驗證，有超過500名行業專家參與的GB/T 5750修訂工作，最終大功告成。

本次修訂微生物指標主要內容：新增腸球菌和產氣莢膜梭狀芽孢桿菌兩個檢測指標、3種檢測方法和增加菌落總數酶底物法新方法。

其中產氣莢膜梭狀芽孢桿菌是厭氧菌，標準中要求使用厭氧培養裝置在36℃下培養，如何選擇合適的厭氧培養裝置達到好的培養效果就顯得尤為重要。

目前市場上常見的有三類設備或手段：

一、厭氧培養箱（厭氧工作站）

厭氧培養箱（工作站）是偏重于厭氧環境下的操作。在厭氧環境下氧氣濃度＜1%，不能做到氧濃度為0%；并且厭氧培養箱（工作站）只能做厭氧環境培養，不能在一個箱體內同時實現不同的氣體環境；厭氧培養箱的控溫效果不如普通培養箱，同時由于厭氧培養箱（工作站）普遍體積較大，使用中耗氣量特別大，操作和維護也比較繁瑣，不適合小批量的實驗需求。

二、產氣袋

在沒有購置儀器時的替代方案，使用產氣袋進行厭氧菌、微需氧菌培養，優點是體積小，使用方便靈活，臨時性、應急性較好。產氣袋不足之處是，要達到厭氧環境所需時間較長，大概在40-60分鐘左右，存在時間過長、培養效果差、陽性率低的普遍現象，沒有質量保障體系，不能保證厭氧環境，這也是誤檢和漏檢的重要原因之一。

另外，產氣袋會產生大量實驗室垃圾，且單次使用成本較高，更適合應急或外出采集標本時使用。

三、智能厭氧微需氧培養系統（厭氧罐法）

此類設備偏重于厭氧環境下的培養。工作原理是通過真空抽排置換使培養罐內快速達到所需要的氣體培養環境，此方法具有良好的操控性與重復性。可在幾分鐘內使培養罐內達到厭氧環境、微需氧環境，也可以根據需求任意調節培養罐內的氧氣濃度；更加簡單化、智能化。主要有幾個特點：

(1)靈活性強：可連接不同容量的培養罐、每個培養罐可提供不同的培養環境。并可根據標本量的多少相應增加或減少罐體，不會出現超負荷和利用率低的情況。

(2)制備氣體環境速度快：短時間內達到所需的氣體環境，厭氧環境3分鐘，微需氧環境僅需1分鐘。

(3)使用成本低：耗氣量特別少，后期使用成本非常低，也避免經常更換培養氣體導致的麻煩。

(4)有質量保障體系：設備主機在將培養罐內氣體環境制備成所需的氣體環境過程中，主機會對培養罐做密封檢測，保證培養罐的密封培養效果；培養罐與主機脫開后，仍可全程監控培養罐內的氧氣濃度，如有漏氣報警提示。

     三個培養方法對比表：

四、HD-AN系列智能厭氧微需氧培養系統

華端生物研發生產的HD-AN系列智能厭氧微需氧培養系統適用于厭氧氣體環境下的培養，該系統根據真空置換抽排方法，把罐內氣體更換為氣瓶內的氣體，從而創造您所希望的培養條件。HD-AN系列智能厭氧微需氧培養系統可以做厭氧氣體環境的培養、微需氧氣體環境的培養，還具有自定義設定氧氣濃度的氣體環境培養。食品安全風險監測中微生物的生長環境不同，要求的氣體環境不同；微需氧菌的生長環境一般在氧濃度4%-6%的條件下生長較好，比如幽門螺旋桿菌在4%的氧濃度條件下長得最好、空腸彎曲桿菌在5%的氧濃度條件下長得最好、嗜血桿菌適合在12%的氧濃度環境中生長。華端生物的厭氧、微需氧培養系統的氧氣濃度調節功能最寬泛，調節范圍0.1%-18%，調節精度最高，氧濃度調節步進最高為0.1%。這就滿足了不同厭氧微生物的生長氣體環境。

 華端生物的厭氧、微需氧培養系統具有質量保障功能  有了質量檢測功能培養罐內的氣體質量才有可靠性。當培養罐與主機系統脫開放入37℃孵育箱進行培養時，如何能保證培養罐不漏氣？如何能保證培養氣體環境質量？這就要靠主機的質量檢測功能了以及無線氧濃度實時監測功能。

(1)檢測培養罐與主機的連接是否完好。這樣可以保證主機系統各個元器件工作正常；連接的培養罐也正常。

(2)檢測輸入氣體壓力是否符合要求。這樣可以保證培養罐在達到氣體環境時，罐內既不會帶正壓、也不會帶負壓。

(3)檢測罐體在低氣壓狀態下是否有泄漏。這樣可以保證罐體沒有任何泄漏。

(4)檢測罐蓋在近大氣壓狀態下是否有泄漏。這樣可以保證罐蓋絕對密封。

(5)檢測催化劑（鈀顆粒）活性是否符合要求。在執行厭氧程序時，主機系統要對催化劑活性進行檢測，有活性的催化劑才能把培養罐中剩余的0.16%氧氣消耗掉。從而達到100%的厭氧環境。

只要有任何一個質量檢測不通過，系統就會停止執行程序，顯示錯誤信息，從而保證培養罐內的氣體環境質量與培養需求。

6.使用培養罐進行培養具有很多的優點

(1)每一個培養罐可以有獨立的氣體環境，不同的培養罐可以有不同的氣體環境。

(2)每一個培養罐是獨立的空間，不同性質的樣本可以放在不同的罐體內，避免交叉污染。

(3)不同規格的培養罐，可以放置不同數量的培養樣本，還可以放置不同規格的培養樣本；隨著培養樣本數量的多少，隨時增減培養罐的數量。

(4)培養罐使用的是PMMA材料，高光潔度，清晰透明，罐體與罐蓋透明便于使用者在培養過程中隨時觀察培養樣本的培養狀況，不必打開培養罐觀察培養效果。

(5)罐體與罐蓋抗震抗沖擊，氣密性好；罐蓋凹型槽設計與高質量O型橡膠圈確保罐體與罐蓋緊密結合，有效避免泄漏。

(6)培養罐體積小，重量輕，密封性好，便于攜帶；可用于短期菌株保藏，還可做長途運輸樣本。

使用該儀器設備后，可以有效提高微生物室的工作效率，保證食品安全風險微生物診斷的準確性，避免漏檢和誤檢，所以開展厭氧菌實驗室培養檢測項目是極為必要的。

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